XXV CONGRESSO NAZIONALE ITALIANO DI ENTOMOLOGIA

La proteina ANK1, codificata dal polydnavirus TnBV, induce apoptosi in vivo e in vitro interagendo con la proteina Alix. Toxoneuron nigriceps (Hymenoptera, Braconidae) è un parassitoide endofago degli stadi larvali di Heliothis virescens (Lepidoptera, Noctuidae). L’espressione dei geni del bracovirus associato a T. nigriceps (TnBV), nelle larve parassitizzate, gioca un ruolo importante nella soppressione della risposta immunitaria e nelle alterazioni dell’equilibrio endocrino dell’ospite. Il genoma di tale polydnavirus è attualmente in fase di studio: sono stati isolati diversi geni virali espressi nei tessuti delle larve parassitizzate ed il loro possibile ruolo è stato in parte chiarito. Una delle famiglie geniche identificate, è caratterizzata da ripetizioni di anchirine e mostra similarità significativa con il gene IkB, un inibitore del fattore nucleare di trascrizione kB (NF-kB). È stato dimostrato che la proteina ANK1, in cellule di mammifero, è in grado di modulare negativamente la via di segnalazione NF-kB, impedendone la sua traslocazione nel nucleo e quindi la sua funzione di regolatore della risposta immunitaria. Riportiamo il ruolo di TnBVank1 sia in vitro che in vivo, rispettivamente nelle cellule policlonali di insetto Drosophila Schneider’s S2 che esprimono il gene TnBVank1 stabilmente, e negli emociti di H. virescens precedentemente trasfettati transientemente con il gene TnBVank1. Nelle cellule S2 sono stati osservati nuclei apoptotici e un incremento dell'attività della caspasi-3. Questo risultato è in accordo con quanto osservato negli emociti, infatti il saggio fluorimetrico della caspasi-3 ha rilevato un’elevata attività di questo enzima quando questi esprimevano il gene TnBVank1 mediante trasfezione transiente in vivo. Al fine di studiare le vie biochimiche in cui TnBVank1 è coinvolto e per investigare il meccanismo attraverso il quale induce apoptosi, sono stati effettuati esperimenti di co-immunoprecipitazione delle proteine estratte dalla linea di cellule S2 che esprime stabilmente TnBVank1. E’ emerso che ANK1 interferisce con il pathway di NFkB, interagendo con NFkB e con diverse altre proteine coinvolte nella morte cellulare programmata. Tra queste, la nostra attenzione si è focalizzata su Alix (ALG-2-interacting protein X), un interattore di ALG-2 (apoptosis-linked gene protein 2). Il possibile ruolo dell’interazione ANK1-Alix è stato analizzato mediante silenziamento genico di Alix, (RNA interference), in vitro e in vivo, ed è stata valutata l’attività apoptotica nei campioni silenziati. I risultati hanno mostrato una riduzione significativa dei livelli di apoptosi sia nelle cellule policlonali S2 che negli emociti di H. virescens che esprimevano il gene TnBVank1. Questi risultati indicano che ANK1 induce apoptosi interagendo con Alix, suggerendo che questo ruolo potrebbe essere rilevante nella soppressione della risposta immunitaria osservata nelle larve di H. virescens parassitizzate da T. nigriceps.